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医汇心血管学术 > 在体细胞外,细胞内记录方法经验交流,期待各位战友共同探讨

在体细胞外,细胞内记录方法经验交流,期待各位战友共同探讨

发表于 2014-10-09 14:41:08
在体细胞外,细胞内记录方法经验交流,期待各位战友共同探讨。  本人从开始做在体细胞外、细胞内记录实验已有几年了,其中走了不少弯路,也有些许体会。结合园子里其它战友发的一些相关的帖子。对在体记录方法做一专题总结。希望各位战友畅谈您的经验与体会。  (一) 关于动物手术及固定:  1. 立体定位仪的使用:  http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/7569424_0.html   http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=156&id=9752944&sty=3&age=0&tpg=1&ppg=1#9752944   关于动物的固定,个人的体会是牢固就好,不一定非要用立体定位仪来固定。由于本实验室主要从事听觉研究,所以没有采用耳杆固定的方法,而是采用自制的夹子夹在动物的鼻骨和上额骨之间来固定,这样就可以保证外耳道不受阻挡。另外,实验过程中,可能会出现呼吸道分泌物增多,堵塞的现象。个人体会:气管切开有时也不能够解决问题,而术前肌注阿托品则效果比较好。  2. 动物的手术:再次推荐Pinault D A new stabilizing craniotomy-duratomy technique for single-cell anatomo-electrophysiological exploration of living intact brain networks. J Neurosci Methods. 2005 Feb 15;141(2):231-42.的文献,非常实用。  http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=156&id=10947321&sty=1&tpg=1&age=0   补充一点:如果实验所需记录区域较大,颅骨开孔较大时,可能会遇到脑组织水肿,膨出的情况,个人感觉:文献中介绍的术前地塞米松注射基本无效。改变压杆的位置,减少对颅骨的压力,降低躯干使其低于颅骨平面等方法都有一定的缓解作用。如果实在不行就只有采取脑脊液引流术了。引流部位:通常为枕骨大孔,方法:紧贴颅骨后方边缘垂直向下剪开颈部肌肉,即可看到一黄白色韧膜,用1号注射器针头水平刺入,即可看到清亮的脑脊液流出,在引流部位放置一小团棉花,即可持续引流,有效的防止脑水肿。  (二) 关于记录不到信号:做胞外记录的战友可能都会过这样的经历,不知道问题出在了那里,总是记录不到信号。怀疑电极出了问题,系统出了问题,动物问题…… 个人总结了以下三点原因,期待各位战友补充。  (1) 核团定位:记录一些体积较小、位置较深的核团时,记录不到理想的信号最可能的原因就是定位不准确,个人体会深部核团的定位过程中经验比图谱所提供的数字更加重要,只有反复的练习,才有可能准确的定位。而一些比较表浅的核团或区域(如皮层)如果记录不到信号,则很有可能是手术过程中造成了损伤所致。  (2) 系统连接问题:这是我做实验以来走的最大的一段弯路。有些前置放大器多通道探头连线不同的颜色代表不同的通道。我刚进实验室时由于没有注意到这一点,实验摸索了半年也没记录到任何信号,后来在仪器公司主页的说明书中无意发现相关连线颜色及对应通道的说明才算解决了问题。所以请各位新来的战友一定注意,实验开始前一定要测试系统连接是否正确。测试时如果对核团定位把不准的话,可以先在海马记录。因为海马定位相对比较容易,而且自发放电也很多,比较容易记录到电信号。如果在海马区域也没有电信号的话,那很有可能就是系统连接出问题了。  (3) 电极的问题: 出现这个问题的可能性比较小,一般金属电极如果反复使用多次,绝缘层褪掉后电阻下降,可能会记录不到信号,也有可能是被噪声掩盖了。而玻璃电极如果在推进过程中断裂也会导致记录不到信号,但这时噪声信号会明显增强,基线变宽。所以还是比较好判断。  (三) 关于干扰及排除,园子里有cma1954老师及其他战友关于记录干扰问题详细深入的评述特链接如下系统干扰: http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/4200971_0.html http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=41&id=166877&sty=3&keywords=%B5%E7%C9%FA%C0%ED 电极本身引起的干扰 http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/4273462_0.html 暂时只想到了这么多,期待各位战友补充,共同分享你我的在体电生理实验体会及心得。 来源:丁香园
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